細胞復(fù)蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25?TA的胰蛋白酶，放人細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

iPS存在的風(fēng)險

1. iPS 與ES細胞基因表達雖很相似，但iPS細胞存在遺傳缺陷．

2. iPS細胞的成瘤性，不同體細胞來源的iPS細胞成瘤性有差異．因此，應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓w細胞或篩選安全型IPS細胞克服IPS細胞臨床cure的成瘤性．

3. iPS細胞及其體外誘導(dǎo)分化細胞的異質(zhì)性．體細胞重編程不充分(partiallyreprogrammed IPSCs)、篩選標準不嚴緊和iPS細胞攜帶供體．細胞的表觀遺傳記憶和iPS 細胞分化不定向都導(dǎo)致細胞異質(zhì)性，異質(zhì)性是導(dǎo)致iPS細胞成瘤的潛在因素

4. iPS細胞體外定向分化細胞的功能與行為研究尚少，尤其在細胞cure上，目的細胞是否會在cure靶位或遷移到非靶位點成瘤，或異位形成組織等是亟待闡明的問題．