等溫核酸試劑盒

什么是RPA?

概念:

重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，適宜反應(yīng)溫度在37°C左右。

核酸試劑盒

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進(jìn)行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過凝膠電泳進(jìn)行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號進(jìn)行動力學(xué)分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴(kuò)增。

國內(nèi)核酸試劑企業(yè)快速跟進(jìn)，以公開的病毒序列作為靶序列，開發(fā)針對這一病毒的試劑。截至發(fā)稿，動脈網(wǎng)從公開找到98款已經(jīng)完成開發(fā)的熒光PCR法SARS-CoV-2病毒的核酸檢測試劑盒，當(dāng)然還有很多在研產(chǎn)品和未公布產(chǎn)品信息的試劑盒沒有被統(tǒng)計在內(nèi)。

根據(jù)規(guī)定，核酸檢測試劑在疫情期間可以免臨床試驗先上市，后補(bǔ)充臨床試驗數(shù)據(jù)，審批有效期為1年。核酸檢測試劑盒獲國家局審批上市后，即可進(jìn)入各地醫(yī)院和逐步開放的第三方醫(yī)學(xué)檢驗所進(jìn)行核酸檢測，對疾病預(yù)防控制中心的人群篩查工作形成有力補(bǔ)充。

“強(qiáng)烈推薦CT影像作為目前新冠的診斷方法”，她表示，“病毒核酸檢測是確診新型冠狀病毒無創(chuàng)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，然而檢測結(jié)果‘CT陽性、核酸陰性’的結(jié)果，可能影響臨床排查。目前新型冠狀病毒核酸檢測特異性高、敏感性偏低，不排除存在部分假陰性?！?

在現(xiàn)實中，也出現(xiàn)了核酸試劑盒檢測數(shù)次陰性，卻確診為新冠的案例。