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PCR實驗室工作基本原則
工作結(jié)束后,必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應當可耐受諸如化學物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。
PCR實驗室注意事項
幾個區(qū)域的大小設置情況,試劑準備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。
PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)
用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理,如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),故應當注意實驗人員的安全防護。
PCR實驗室工作基本原則
工作結(jié)束后,必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應當可耐受諸如化學物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。
PCR實驗室通風系統(tǒng)及壓力控制
各區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流、物流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。
PCR實驗室注意事項——試劑儲存和準備區(qū)
貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區(qū),不能經(jīng)過擴增檢測區(qū),試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應當保存在該區(qū),應當保存在標本處理區(qū)。
PCR實驗室各區(qū)功能及主要設備
試劑準備區(qū):主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設備加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。
PCR實驗室的設計原則
使用實時熒光PCR儀,擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并;
采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對(bp),對紫外線損傷不敏感,因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間,好是照射過夜。
實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。