等溫核酸試劑盒

RNA試劑盒使用方法

使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)提取試劑盒， 如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒，但其售價(jià)較高，單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大，對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有必要購(gòu)買(mǎi)，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題（如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候，要從國(guó)外發(fā)貨，會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間）。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷(xiāo)售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯(cuò)，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

核酸試劑盒

樣本采集質(zhì)控重要性

樣本采集作為核酸檢測(cè)的首步，其中涉及的采樣耗材和病毒保存液的對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不合格樣本會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。在新冠核酸檢測(cè)中，不合格樣本通常是由于采樣問(wèn)題和采樣用具問(wèn)題導(dǎo)致的。

合格的病毒保存液目前主要要求兩點(diǎn)：

1.保證病毒的充分滅活，防止采樣、運(yùn)輸和檢測(cè)過(guò)程的風(fēng)險(xiǎn)。

2.保證病毒核酸（RNA）在采集、運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止樣本運(yùn)輸保存過(guò)程中降解導(dǎo)致檢測(cè)的“假陰性”。

RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個(gè)基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實(shí)現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來(lái)說(shuō)，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過(guò)反應(yīng)終點(diǎn)的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號(hào)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析，不適合終點(diǎn)檢測(cè)(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來(lái)，可以一步實(shí)現(xiàn)RNA模板的實(shí)時(shí)擴(kuò)增。

提取技術(shù)是系統(tǒng)性核酸檢測(cè)方案的關(guān)鍵目前大量的核酸檢測(cè)試劑投入疫情，但是防控效率、檢測(cè)效率卻未有明顯提升。在央視記者采訪前線檢驗(yàn)科工作人員的報(bào)道中，也指出目前核酸提取環(huán)節(jié)存在差異，影響了檢測(cè)能力的提升。

除前期的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、滅活等處理，核酸檢測(cè)產(chǎn)品在檢測(cè)過(guò)程中主要分為2個(gè)步驟，即核酸提取、擴(kuò)增檢測(cè)。擴(kuò)增檢測(cè)部分主要取決于前步驟核酸提取的純度，以及擴(kuò)增儀器的性能，因此核酸檢測(cè)產(chǎn)品本身的差異性關(guān)鍵在于“核酸提取”這一步。