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發(fā)布時(shí)間:2021-10-19 05:51  






凍存袋技術(shù)

是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。



細(xì)胞凍存的操作步驟

1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血的凍存培養(yǎng)液;

2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。

3. 去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來;

4. 離心1000rpm,5min;

5. 去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的密度為5×106/ml~1×107/ml;

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;

8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。



凍存袋簡(jiǎn)介

屬于醫(yī)院器械領(lǐng)域,涉及一種適合細(xì)胞回輸用的細(xì)胞凍存袋,即生物樣品存儲(chǔ)袋,包括:一存儲(chǔ)袋袋體和與其逐一并排排列的2~6個(gè)第二存儲(chǔ)袋袋體;一和第二存儲(chǔ)袋袋體之間,以及各個(gè)第二存儲(chǔ)袋袋體之間設(shè)置袋體間連接管路;一存儲(chǔ)袋袋體上沿設(shè)置一輸入口并通過該輸入口與連接管的一端連接,生物樣品經(jīng)由連接管并通過輸入口進(jìn)入一存儲(chǔ)袋袋體;一存儲(chǔ)袋袋體上沿設(shè)置一取樣口,各個(gè)第二存儲(chǔ)袋袋體上沿設(shè)置第二取樣口,一取樣口和第二取樣口用于將存儲(chǔ)在袋體內(nèi)的生物樣品取出.本存儲(chǔ)袋能夠方便地用于對(duì)生物樣品例如臍帶血造血千細(xì)胞,血漿等處置,存儲(chǔ),冷凍,復(fù)蘇以及直接給患者回輸生物樣品特別是造血細(xì)胞.




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