胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計算,每1mg 的效價不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶,只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯1仿和乙1醚。分子量24 000,pI 10.5,zui適pH值7.8~8.5左右。pH值2~3是穩(wěn)定的。pH值5以上易自溶失活。pH>9.0不可逆失活。Ca2 對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制1劑對其活性有強(qiáng)烈抑制。臨床用于消1炎,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。
蛋白表達(dá)系統(tǒng)
蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。一般由以下幾個部分組成:
1、宿主。表達(dá)蛋白的生物體??梢詾榧?xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達(dá)蛋白的種類也不相同。
2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細(xì)菌)表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo),外源基因可以在宿主中表達(dá)。
3、輔助成分。有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進(jìn)入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。
folin―酚試劑法(lowry法)是蛋白質(zhì)測定法中較靈敏的方法之一。過去此法是應(yīng)用相對廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現(xiàn)在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin―酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是:在堿性條件下,蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。folin―酚試劑中的磷鉬酸鹽―磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產(chǎn)生深蘭色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,蘭色深度與蛋白的量成正比。

folin―酚試劑法早先是由lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測定的基本步驟。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。這個測定法的優(yōu)點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時間較長,要準(zhǔn)確控制操作時間,標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式,且專一性較差,干擾物質(zhì)較多。對雙縮脲反應(yīng)發(fā)生干擾的離子,同樣容易干擾lowry反應(yīng)。而且對后者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素(0.5%),硫酸納(1%),NaNO濃度(1%),TCA(0.5%),乙醇(5%),C4H10O(5%),CH3COCH3(0.5%)等溶液對顯色無影響,但這些物質(zhì)濃度高時,必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液,只須加濃碳酸鈉―NaOH溶液,即可顯色測定。若樣品酸度較高,顯色后會色淺,則必須提高碳酸鈉―NaOH溶液的濃度1~2倍。