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制備液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)一、液相色譜理論發(fā)展簡(jiǎn)況色譜法的分離原理是:溶于流動(dòng)相( phase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí),由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,從而先后從固定相中流出。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。又稱為色層法、層析法。
色譜法早是由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特(Tswett)在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的,色譜法(Chromatography)因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。
隨著柱填料的快速發(fā)展,反相色譜法的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大,現(xiàn)已應(yīng)用于某些無機(jī)樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖液控制流動(dòng)相的pH值。這就是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的細(xì)菌污染的原因,解決它的方法很簡(jiǎn)單,就是確保水的可靠性。但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH值會(huì)使硅膠溶解,太低的pH值會(huì)使鍵合的脫落。有報(bào)告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。
正相色譜法與反相色譜法比較表
正相色譜法 反相色譜法
固定相極性 高~中 中~低
流動(dòng)相極性 低~中 中~高
組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出