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分光分度計(jì)的概述
分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),(2)380~780nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進(jìn)行校正檢定。
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分光光度計(jì)的操作方法
1.接通電源,打開儀器開關(guān),掀開樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘。
2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí),需選用較高的檔。)
3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕。
4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。
5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,使讀數(shù)盤指針指向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋,調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,使空白管的t=100,指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。
7.比色完畢,關(guān)上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
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1)儀器不能調(diào)零??赡茉颍?
a)光門不能完全關(guān)閉。解決方法:修復(fù)光門部件,使其完全關(guān)閉。
b)透過率“100%”旋到底了。解決方法:重新調(diào)整“100%”旋鈕。
c)儀器嚴(yán)重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒,用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥,并更換干燥劑。
d)電路故障。解決方法:送修理部門,檢修電路。
2)儀器不能調(diào)“100%”??赡茉颍?
a)光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位,或更換光源燈(盡管燈還亮)。
b)比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。
c)光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。
d)電路故障。解決方法:調(diào)修電路。
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分光光度計(jì)的關(guān)鍵參數(shù)有哪些
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選擇可見和紫外可見的分光光度計(jì)所關(guān)注的*關(guān)鍵的指標(biāo)有三點(diǎn):一是波長范圍,二是波長準(zhǔn)確度,三是雜散光參數(shù)。波長范圍的選擇是由用戶實(shí)驗(yàn)需要所定,波長范圍越寬的價(jià)格越貴;波長準(zhǔn)確度及雜散光參數(shù)的數(shù)值越低,表示性能越好。
影響顯色反應(yīng)的主要因素
(1)顯色劑用量:通過實(shí)驗(yàn)來確定*適用量;
(2)反應(yīng)液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性;
(3)反應(yīng)溫度:不同的顯色反應(yīng)需要不同的反應(yīng)溫度,一般顯色反應(yīng)可在室溫下完成;
(4)顯色反應(yīng)時(shí)間:顯色反應(yīng)的速度有快有慢;
(5)干擾離子的影響:應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其影響;