反相色譜(RPC)是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機溶1劑的水溶液為流動相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣，RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非極性基團所覆蓋，表現(xiàn)出強烈的疏水性。因此，必須用極性有機溶1劑或其水溶液進行溶質(zhì)的洗脫分離。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性，一般疏水性越大，分配系數(shù)越大。初始階段基線應持續(xù)上升，在到達老化溫度后5-10分鐘開始下降，并且會持續(xù)30-90分鐘。當固定相一定時，可以通過調(diào)節(jié)流動相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。RPC主要應用于相對分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，也可以用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析和純化。由于反相介質(zhì)表面為強烈疏水性，并且流動相為低極性的有機溶1劑，生物活性大分子在RPC分離過程中容易變性失活，所以，以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時，應注意選用適宜的反相介質(zhì)。

塞桿密封墊 現(xiàn)象：在高壓下壓力不穩(wěn)定，從泵頭滲漏流動相液體，反映在分析結(jié)果上是樣品保留時間的改變。以前填料純化技術(shù)不是很成熟，十八烷基鍵合到硅膠表面不是很完全，硅膠上總是少量的硅羥基在外面。原因：墊圈與運動著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中易磨損的部件。緩沖液或其它含鹽的流動相更加速墊圈的磨損。墊圈磨損是不可避免的。措施：一旦墊圈損壞只有進行更換。更換時注意要將柱塞桿縮至后，松開泵頭的兩根收緊螺釘，操作時處處以平衡的動作進行，切不可搖動或上下擺動泵頭，否則柱塞桿極易折斷。

LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準備：　　1、流動相前處理：將流動相經(jīng)過0.45um的微孔濾膜過濾后，倒入流動相瓶中，放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右。有兩種方式推薦：（1）的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質(zhì)量也放心?！　?、流動相安裝：將處理好的流動相放在儲液托盤上，將對應通道的洗液管路分別放入流動相瓶中，蓋好瓶蓋并記好對應通道的流動相種類?！　?、樣品記錄：將樣品處理稀釋后使用注射1器過濾頭過濾后裝入1.5ml樣品瓶中（大約三分之二），放入自動進樣器的樣品架上，并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件。　　4、色譜柱安裝：打開柱溫箱門，將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上，在色譜柱上連接配管，在色譜柱出口端連接檢測器入口端的藍色PEEK管?！　?、檢查清洗液：在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇：水溶液；含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇：水溶液。