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PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)后的質(zhì)量控制存在缺陷

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制分為：室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制。

室內(nèi)質(zhì)量控制是指實(shí)驗(yàn)室人員通過一定的步驟方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性進(jìn)行持續(xù)評(píng)估，旨在監(jiān)控常規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的精度，提高實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠及可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。

實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制是指客觀比較實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果與目標(biāo)值之間的差異，并由外部機(jī)構(gòu)采取一定措施方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果進(jìn)行持續(xù)、客觀的評(píng)價(jià)。

pcr實(shí)驗(yàn)室凈化裝修

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標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。

標(biāo)本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計(jì)算冷負(fù)荷時(shí)，需要將它們計(jì)算在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進(jìn)行提取核酸的操作。

為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實(shí)驗(yàn)室，排風(fēng)經(jīng)過過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺(tái)，實(shí)驗(yàn)室的面積增加10㎡；標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25㎡~30㎡之間。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

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擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

在巢式PCR測(cè)定中，通常在一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀，在實(shí)驗(yàn)室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。建議采用≥10Pa壓差，在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。