結(jié)合BI生產(chǎn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計(jì)之初是為了培養(yǎng)HeLa細(xì)胞以及部分哺乳類的成纖維細(xì)胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)。以MEM為基礎(chǔ)，Stanner利用Earle'sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進(jìn)一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基，可廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。

支原體染預(yù)防，俗話說，預(yù)防勝于治，所以操作的器材與環(huán)境消毒也至關(guān)重要：1.超凈工作臺(tái)預(yù)防，BI也提供Pharmacidal (貨號(hào): IC-110100)作為相應(yīng)的處理試劑，Pharmacidal可有效預(yù)防真菌（和孢子），細(xì)菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長(zhǎng)和污染。Pharmacidal不需稀釋，每次使用超凈工作臺(tái)前或每天噴灑一次臺(tái)面，二氧化碳培養(yǎng)箱每?jī)芍芤淮螄姙⑾荆瑖姙⒑笞屍渥匀伙L(fēng)干，無需擦拭。

CFSE是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料，具有細(xì)胞膜通透性，能夠自由進(jìn)入細(xì)胞；當(dāng)CFSE擴(kuò)散穿過細(xì)胞膜，會(huì)與細(xì)胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應(yīng)而被激發(fā)，發(fā)出綠色熒光，這些帶熒光的CFSE會(huì)進(jìn)一步與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白。每當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行分裂增殖，胞內(nèi)熒光蛋白會(huì)被平均分配到下一代細(xì)胞中，因此細(xì)胞熒光強(qiáng)度會(huì)隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低，可用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步偵測(cè)分析得出細(xì)胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度，對(duì)于終判斷細(xì)胞增殖結(jié)果有直接性的影響！

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)可能導(dǎo)致衰老的原因：1.細(xì)胞傳代次數(shù)比較多，一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)！大量擴(kuò)增細(xì)胞，將細(xì)胞進(jìn)行凍存，在必要的時(shí)候重新復(fù)蘇。2.胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng)，胰酶消化時(shí)間過長(zhǎng)容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松;細(xì)胞傳代時(shí)需要留意胰酶消化的時(shí)間。消化過度，在消化細(xì)胞時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞的表面蛋白有較強(qiáng)的損傷，所以消化的時(shí)間不能過長(zhǎng)，建議使用合適濃度和pH值的消化酶，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞衰老和分化。