低溫生物為什么可以在零下保藏？

低溫生物都是需要保護(hù)劑的，動物細(xì)胞也可以。細(xì)菌結(jié)構(gòu)問題使得它比較容易保存，只用加10%左右的甘油就可以在-20攝氏度保存。動物細(xì)胞需要加DMSO等，并且需要放到-80或者液氮才行冷凍保藏是指將于-20℃以下的溫度保藏，通過冷凍，使微生物代謝活動停止。就是通過低溫來抑制微生物的生命活動，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素。

                                                         喚醒盛水的低溫生物

目前，保藏中心保存有各類微生物資源5700種、50000余株，用于程序的生物材料有1萬余株。那么，數(shù)目龐大的微生物資源，從“清醒”到被“沉睡”經(jīng)歷了什么？

“首先進(jìn)行存活度和純度檢測，然后用基因測定來核實(shí)的正確性，繼而用真空冷凍干燥法或液氮超低溫凍結(jié)法保存?！北２貢r一般兩種方法會互為備份，使用液氮法保存6份，真空法則要備份12個。

“通過冷凍技術(shù)處理后，細(xì)菌就會處于休眠狀態(tài)。如果要活化使用，則需通過相應(yīng)的培養(yǎng)液進(jìn)行活化，才能恢復(fù)活性。”以格氏嗜鹽堿為例說，復(fù)活所需的營養(yǎng)為：20%的氯化鈉，酪蛋白、氨基酸、pH值為9等，在適宜的溫度和培養(yǎng)基中，這些沉睡的細(xì)菌便會被重新喚醒。

分離篩選低溫生物的基本程序

流程

4.1 優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

融化培養(yǎng)基→倒平板→打散孢子團(tuán)粒→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養(yǎng)→糖化酶活力測定→保存

4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分離

制培養(yǎng)基→倒平板→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→挑菌落→接牛乳管→培養(yǎng)觀察→傳代培養(yǎng)→挑選凝乳管→乳酸測定→保存

5 步驟

優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

（1）融化淀粉察氏培養(yǎng)基，稍冷后倒平板與斜面數(shù)個。

（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振蕩打散孢子團(tuán)粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然后將其用無菌紗布過濾于無菌試管中。

（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取后3個稀釋度的稀釋液各0.2mL，于淀粉察氏培養(yǎng)基平板上用無菌涂布器分別依次涂布2至3個皿，30℃培養(yǎng)1~2d。

（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。

低溫生物篩選過程及應(yīng)用價值

分離(separation)就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術(shù)區(qū)分開，并按照實(shí)際要求和菌株的特性采取迅速、準(zhǔn)確、有效的方法對他們進(jìn)行分離、篩選，進(jìn)而得到所需微生物的過程。菌株分離、篩選(screening)雖為兩個環(huán)節(jié)，但卻不能絕然分開，因?yàn)榉蛛x中的一些措施本身就具有篩選作用。工業(yè)微生物產(chǎn)生菌的篩選一般包括兩大部分:一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的菌株進(jìn)一步純化并進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒別。 ? {cF'RB. 在實(shí)驗(yàn)工作中，為使篩選達(dá)到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進(jìn)行收集和篩選: 4jis﹨W}%L3

(1)向保藏機(jī)構(gòu)索取有關(guān)的菌株，從中篩選所需菌株。 ^ 5u}      

(2)由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進(jìn)行分離篩選。 O|%> <I? I

(3)從一些發(fā)酵制品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產(chǎn)生菌，從酒醪中分離淀粉酶或糖化酶的產(chǎn)生菌等。該類發(fā)酵制品經(jīng)過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統(tǒng)產(chǎn)品中容易篩選到理想的菌株。 r N$_(%m_N

菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集、分離、產(chǎn)物鑒別幾個步驟。 8*4X%a=O f

 含微生物樣品的采集  Q?7U  iTZ

自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數(shù)量十分可觀。但總體來講土壤樣品的含菌量很多。  G ^H Z4jg