ELISA試劑盒的分類

檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結(jié)果的重復(fù)性。

Elisa試劑盒的注意事項

Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補體系統(tǒng)，在較少數(shù)情況下（培養(yǎng)ES細胞，平滑肌細胞時）建議滅活，在培養(yǎng)其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產(chǎn)生沉淀，如必須滅活請按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。

Elisa試劑盒培養(yǎng)基：無培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性、細胞體外分化方面有優(yōu)勢，但是，仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或細胞生長狀態(tài)不良時，常常會先使用有的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛后再換成培養(yǎng)液。

Elisa試劑盒有哪些需要注意的？

1. 跟著病況的進展或由其他因素影響，某些在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標本進行預(yù)處理。間接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。

3.在成批手藝檢測中，還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導(dǎo)致過錯效果或定量不準。

Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

顯色淡，靈敏度偏低

1  試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2  樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）

3  酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥

4  包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5  樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。

6  洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；

7  偶聯(lián)HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置

8  錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑，重新配置

9  TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間 確定合適的孵育時間：人為判定-高濃度的標準品出現(xiàn)深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65

10  樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng) 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認樣本稀釋倍數(shù)。

11  濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對 確認儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。

12  酶標板不適合做ELISA 不能使用細胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA高吸附力板子。