活性氧檢測(cè)試劑盒（Reactive oxygen species assay kit）是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。 本試劑盒提供了活性氧陽(yáng)性對(duì)照試劑Rosup以便于活性氧的檢測(cè)。Rosup是一種混合物（compound mixture），濃度為50mg/ml。

一、注意事項(xiàng)

1、探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。

2、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描，以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。

3、盡量縮短探針裝載后到測(cè)定所用的時(shí)間（刺激時(shí)間除外），以減少各種可能的誤差。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

單細(xì)胞RNA測(cè)序

單細(xì)胞RNA測(cè)序也稱scRNA-Seq。蛋白質(zhì)上樣濃度不要超過(guò)10mg/mL,否則會(huì)造成蛋白質(zhì)的聚集或沉淀。通常而言，一般的組織細(xì)胞RNA-seq實(shí)驗(yàn)會(huì)產(chǎn)生1000萬(wàn)個(gè)讀數(shù)，如果一個(gè)基因的頻率超過(guò)50RPKM，即每百萬(wàn)讀數(shù)中每千個(gè)堿基中超過(guò)50個(gè)，這一基因即被認(rèn)為有表達(dá)。泊松分布下，1kb長(zhǎng)的基因有超過(guò)500個(gè)讀數(shù)和4%的小變異系數(shù)，即CV值；哺乳動(dòng)物細(xì)胞通產(chǎn)含有200,000個(gè)mRNA，因此至少要用50個(gè)單細(xì)胞一起才能到達(dá)小CV值；考慮到逆轉(zhuǎn)錄的效率和環(huán)境干擾等因素，為得到準(zhǔn)確的表達(dá)和細(xì)胞種類的識(shí)別，需要使用的細(xì)胞數(shù)量實(shí)際要更多。

◆　HPLC

如果合成的寡核苷酸應(yīng)用于，定向誘變或定量的基因探測(cè)，那么對(duì)其純度要求較高。LncRNA芯片Longnon-codingRNAs（lncRNAs）是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200nt的功能性非編碼RNA分子。脫鹽或OPC純化的寡核苷酸可能達(dá)不到要求，則HPLC純化被廣泛地用于這個(gè)目的。作為一種純化樹(shù)脂，陰離子交換樹(shù)脂或反向樹(shù)脂被用于寡核苷酸純化。陰離子交換樹(shù)脂的HPLC通常顯示95-98%純化效率，對(duì)于達(dá)到35-mer寡核苷酸的純化是充分的。反向樹(shù)脂化的HPLC與陰離子交換樹(shù)脂的HPLC呈現(xiàn)相似的純化效率。因?yàn)镠PLC的純化效率很大程度依靠寡核苷酸的長(zhǎng)度，用HPLC法不能有效純化長(zhǎng)的寡核苷酸（大于35-mer)。

◆　PAGE

對(duì)于長(zhǎng)的寡核苷酸的純化（50-100mer），我們推薦PAGE純化法，它使用交連的聚酰胺凝膠(電泳)作為純化基質(zhì)。單核苷酸多態(tài)性(SNP)實(shí)驗(yàn)SNP(SingleNucleotidePolymorphisn即單核苷酸多態(tài)性,是由于單個(gè)核苷酸改變而導(dǎo)致的核酸序列多態(tài)性(Polymorphism)。盡管PAGE顯示出高的純化效率（＞98%），但它在額外的步驟方面有一些缺陷，比如在PAGE之后需要提取和脫鹽，繼而將導(dǎo)致純化產(chǎn)率的下降。

3.引物的OD數(shù)如何定量？

答：引物合成引物OD數(shù)是這樣測(cè)定的：用紫外分光光度計(jì)，波長(zhǎng)260nm，石英比色杯，光程為1厘米，測(cè)定溶液的光密度。除了文中提到了三個(gè)主流平臺(tái)，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。測(cè)定時(shí)溶液的光密度好稀釋到0.2-1.0之間。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，用1ml水稀釋測(cè)OD值。需要根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出母液的OD值。

4.需要什么級(jí)別的引物？

答：引物常用的純化方式脫鹽、BioRP / OPC純化、PAGE純化、HPLC純化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，確定訂購(gòu)引物的純度級(jí)別。