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等溫核酸試劑盒
據(jù)介紹,RPA檢測的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平,從單個模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點檢測,還可以對擴(kuò)增過程進(jìn)行實時監(jiān)控,甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。
目前,TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長度在500bp以內(nèi)。不過,經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增,也可以生成更長的擴(kuò)增產(chǎn)物,或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量),甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。
什么是RPA?
概念:
重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,適宜反應(yīng)溫度在37°C左右。
重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA)是2006年由英國科學(xué)家研發(fā)的一種核酸恒溫擴(kuò)增技術(shù)。它是利用多種酶參與,在體外模擬生物體內(nèi)DNA復(fù)印,恒溫條件下短時間內(nèi)實現(xiàn)靶基因大量擴(kuò)增,既可以擴(kuò)增DNA,也可以擴(kuò)增RNA。RPA技術(shù)具有恒溫、快速、便攜、靈敏度高、特異性強(qiáng)和操作簡單等優(yōu)點,是目前很有望替代PCR技術(shù)的核酸等溫擴(kuò)增方法,在基層現(xiàn)場診斷中,具有廣闊的應(yīng)用前景。
相對來說RPA是很好的恒溫擴(kuò)增法,可在較低溫下恒溫擴(kuò)增,不需要復(fù)雜儀器設(shè)備,操作簡單、反應(yīng)時間短,特異性好、靈敏度高,可采用電泳、熒光、側(cè)向流試紙等多種方式檢測擴(kuò)增產(chǎn)物
與假陰性相對的是假陽性。這通常是由于樣本被污染或是核酸檢測試劑盒被污染導(dǎo)致的?!叭鄙賴?yán)格控制條件的實驗室環(huán)境、不的檢測操作,以及樣本本身的污染,都會導(dǎo)致假陽性出現(xiàn)?!庇腥烁嬖V記者,“由于事發(fā)突然,很多地方可能沒有檢測條件,因此需要把樣本送到符合條件的實驗室去,而運(yùn)輸途中也有污染風(fēng)險。”此外,檢測試劑盒的探針引物或酶受到污染之后,也會出現(xiàn)假陽性。