分光光度計的工作原理

進行分光光度測定時，請務必采取適當?shù)念A防措施，例如戴手套，具體取決于您使用的生物或化學溶液的類型。

在測量樣品的紫外-可見光譜之前，打開設備并讓燈和電子元件加熱。

準備相同溶液的空白樣品，具有相同的pH和相似的離子強度，但沒有分析的組分;由于比色皿和溶劑可以分散光，因此分析該樣品是必要的步驟。

傳統(tǒng)的分光光度計樣品架設計用于容納塑料和石英碗。將原始溶液吸移到碗中。

擦去任何指紋并濺到碗的外側(cè)后，將比色杯正確插入樣品架并關閉杯蓋門。

永遠不要忘記關上門，因為從開放式分光光度計發(fā)出的紫外線輻射會損壞眼睛和皮膚。

編程將傳輸?shù)綐悠返乃璨ㄩL或波長范圍。這取決于分析的組分可以吸收的佳波長。然后，通過測量空白樣品使機器歸零，這將減去由于樣品緩沖液引起的底部吸光度。

根據(jù)您正在進行的分光光度實驗的類型，可能需要在樣品測量之前生成標準曲線，從中可以終確定樣品中分析的化合物濃度。

讓樣品達到適當?shù)臏囟炔⑤p輕混合，以免引入氣泡。然后可以將樣品直接添加到機器內(nèi)部的碗中，并且可以進行讀數(shù)。

對樣品進行吸光度測量后，對實驗進行適當?shù)挠嬎?例如，確定濃度或酶活性水平。

分光光度計的應用

分光光度計的通常用途之一是測量細胞密度。細胞密度測量可用于產(chǎn)生細菌的對數(shù)生長曲線，從中可以確定重組蛋白整合的佳時間。

分光光度計還可用于測量化學反應速率。在該實施例中，吸光度用于監(jiān)測酶促反應，通過452nm的中間反應隨時間消失?？梢酝ㄟ^將數(shù)據(jù)與適當?shù)牡仁狡ヅ鋪碛嬎阍撁复俨襟E的速率。

微量分光光度計的引入消除了對樣品架的需求。這些分光光度計使用表面張力來保持樣品。

微量分光光度計是測量昂貴的小體積樣品（如生物分子，包括蛋白質(zhì)和核酸）的質(zhì)量和濃度的佳選擇。

蛋白質(zhì)在280nm處的吸光度取決于在色氨酸，酪氨酸和苯丙氨酸中發(fā)現(xiàn)的芳族側(cè)鏈的含量，以及兩個半胱氨酸之間存在的二硫鍵。

蛋白質(zhì)的濃度可以由其在280nm處的吸光度和其吸收系數(shù)確定，該吸收系數(shù)基于氨基酸的組成。

DNA和RNA在260nm處具有大吸光度，從中可以確定它們的濃度。還可以從吸光度讀數(shù)與特定波長的比率來評估核酸的純度。

常見分光光度計分類

(1)可見分光光度計

用來測量待測物質(zhì)對可見光(400～760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器，稱為可見分光光度計?？稍?00nm測定細菌細胞密度。

(2)紫外可見分光光度計

紫外可見光譜儀用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光(200～760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器?？梢詼y定核酸和蛋白的濃度，也可以測定細菌細胞密度，紫外分光光度計又可分為單光束,假雙光束,雙光束。它們的用途又有區(qū)別。