親和柱的區(qū)別

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1ml親和柱和3ml親和柱的區(qū)別很明顯就是兩者的柱體積不一樣。

當然親和柱有很多的種類，比如鎳螯合柱，蛋白A柱等等。

假設是同一種填料的親和柱，那么1ml親和柱和3ml親和柱的區(qū)別就是，1ml柱里面裝載了1ml體積的填料，而3ml柱里面裝載了3ml的填料。

體積越大，能親和吸附的樣品就越多。

親和柱凈化步驟

注意：整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!

----3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內偶見有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用);

----準確移取上述混勻濾液，注入針筒中，調節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過親和柱;

----用20mL 水沖洗柱子(對于飼料及玉米加工副產品等顏色較深的樣液，先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10 mL 10%水沖洗柱子，之后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內沒有殘余液體;

----準確加入1.5mL(色譜級)洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進行相關測定。

親和柱親和層析原理介紹

組氨酸是具有雜環(huán)的氨基酸，每個組氨基酸含有一個咪唑基團，這個化學結構帶有很多額外電子，對于帶正電的化學物質有靜電引力，親和層析是利用這個原理來進行吸附的，親和配體（也就是填料）上的陽離子（一般是鎳離子）帶正電對組氨酸有親和作用。組氨酸標簽是原核表達載體上6個組氨酸的區(qū)段,這個標簽在ph8.0時不帶電,對蛋白質的分泌,折疊,功能基本上無影響.能高度親和鎳離子,用于蛋白質的親和純化.