親和柱的測(cè)定原理

親和柱，吸附力高柱容量大，適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結(jié)合使用，定量檢測(cè)DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用不同的分析方法測(cè)定。

測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓髮悠诽崛∫壕徛ㄟ^(guò)DON親和柱，在親和柱內(nèi)，DON與結(jié)合，洗滌液通過(guò)親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。之后洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

親和柱親和層析技術(shù)原理

IAC也是色譜技術(shù)的一種,可稱(chēng)為色譜技術(shù),是一種利用抗原特異性可逆結(jié)合特性的SPE技術(shù),根據(jù)抗原的高選擇性,從復(fù)雜的待測(cè)樣品中提取目標(biāo)化合物。主要原理是將與惰性微珠共價(jià)結(jié)合,然后裝柱,將抗原溶液過(guò)親和柱,而非目標(biāo)化合物則沿柱流下,然后用洗脫緩沖液洗脫抗原,從而得到純化的抗原,用適當(dāng)?shù)木彌_液和合適的保存方法,柱可以再生備用。其提純效率很高,通常只需一次就可達(dá)到1000～10000倍的純化效果(王澤永,2002)。

親和柱——親和層析的分離原理

生物體中許多大分子化合物具有與其結(jié)構(gòu)相對(duì)應(yīng)的專(zhuān)一分子可逆結(jié)合的特性，如抗原與抗體，酶與底物或抑制，與受體等，這種結(jié)合往往是專(zhuān)一的而且是可逆的，生物分子間的這種結(jié)合力稱(chēng)為親和力，親和層析的分離原理簡(jiǎn)單地說(shuō)就是通過(guò)將具有親和力的兩個(gè)分子中的一個(gè)固定在不溶性的基質(zhì)（也稱(chēng)載體）上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。被固定在基質(zhì)上的分子稱(chēng)為配體，配體與基質(zhì)共價(jià)結(jié)合，構(gòu)成親和層析的固定相，稱(chēng)為親和吸附劑，蛋白質(zhì)的生物特異性可以幫助選擇特異性的配體，一般是目的蛋白質(zhì)與配體結(jié)合而不吸附雜質(zhì)。蛋白質(zhì)吸附后再利用洗脫液的快速變換和加入競(jìng)爭(zhēng)劑的方法進(jìn)行洗脫。

親和柱——親和層析介紹

將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開(kāi)，然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘?，改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱(chēng)為親和層析。利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術(shù)。