ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標(biāo)記物。

解決辦法：請按照操作步驟進(jìn)行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當(dāng)延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

Elisa試劑盒實驗原理

將目標(biāo)包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)，將未結(jié)合的生物素洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留 洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色 棄去底物，重新配置

3  樣品稀釋液污染 棄去稀釋液，重新配置

4  吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底 吸頭盡可能一次性使用

5  不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間） 常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求。

6  偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適的濃度

7  ELISA板子不正確的貯存 酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點的Elisa板

8  沒有正確封閉 在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

9  樣本溶血嚴(yán)重 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴(yán)重溶血樣本會導(dǎo)致背景偏高。