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什么是試劑盒?
ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)試劑盒、酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。
ELISA試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問題及解決辦法
1. 加入反應(yīng)終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶標(biāo)記物。
解決辦法:請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。
b.原因:試劑盒內(nèi)容物未能充分回。
解決辦法:確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。
c.原因:室溫太低。
解決辦法:若室溫太低(<19℃),請(qǐng)于操作步驟4,適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。
d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。
解決辦法: 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。
e.原因:試劑盒已過有效期限。
解決辦法:請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。
Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
將目標(biāo)包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo),將未結(jié)合的生物素洗凈后,加入HRP標(biāo)記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。