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整體柱制備方法是把單體和致孔劑混合液填充到柱子中,經過升溫產生聚合反應,在反應過程利用相分離原理形成貫穿孔結構整體柱,由于整個柱子是一個整體,可以保持較高的孔隙率和較高的機械強度。由于整體柱的孔隙率大, 可以減小流動相阻力和路徑擴散, 提高可及比表面積及病毒吸附載量,從而提高病毒的分離效率。整體柱層析已被證明是病毒及病毒類大分子比較理想的分離方法。但目前整體柱制備方法有很大的局限性,因為在整體柱合成過程中,其孔徑大小是通過反應過程中相分離來決定的,而相分離容易受到溫度,反應速度等影響,因此孔徑大小不容易控制,導致柱間批次的穩(wěn)定性和重復性差,而且不容易制備能滿足生產需求的大尺寸整體柱。這些因素是整體柱不能廣泛用于病毒的分離純化的主要原因。
Protein A 配基
除了基球之外,Protein A 配基也是影響介質性能重要因素,尤其是介質的壽命。GE之所以壟斷Protein A 親和層析介質市場,主要的是GE擁有耐堿性Protein A 技術,其核心技術是通過基因工程改變B domain 不耐堿的3個氨基酸以改善其耐堿性能。納微通過優(yōu)化組合不同片段設計出新序列的Protein A 配基,不僅耐堿性好,而且具有自主知識產權,并能自主實現大規(guī)模生產。納微獨有的耐堿性配基加上具有性能的基球,及優(yōu)化偶聯工藝開發(fā)出的Protein A 親和介質。以下是某單抗項目上UniMab介質載量隨使用次數增加的衰減變化表。每個cycle采用0.1M氫l氧化鈉CIP,接觸時間1小時。連續(xù)200個cycle 后DBC10%依然在初始值的75%左右,充分體現了納微ProteinA介質的良好耐堿性。