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武漢遠大弘元股份有限公司以氨基酸及其衍生物的研發(fā)、生產(chǎn)為基礎(chǔ),以武漢大學生命科學學院和湖北省氨基酸工程技術(shù)研究中心的成果為依托,為客戶提供的產(chǎn)品。
L-半胱氨酸是一種重要的含硫氨基酸,廣泛應用于食品、醫(yī)0藥和化妝品等領(lǐng)域,具有廣闊的應用前景。目前,L-半胱氨酸僅能通過毛發(fā)水解的方法生產(chǎn),然而該工藝具有高污染和低得率等缺點,限制了L-半胱氨酸的大規(guī)模生產(chǎn)。
天津工業(yè)生物技術(shù)研究所研究員劉君帶領(lǐng)的微生物生理和代謝工程研究組和研究員江會鋒帶領(lǐng)的新酶設(shè)計與酵母基因組工程研究組進行合作,通過結(jié)合代謝工程和蛋白質(zhì)工程的方法,系統(tǒng)地改造大腸桿0菌,實現(xiàn)了OAH的合成。在研究中,首先比較了兩種不同來源的高絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶(MetX),然后通過敲除競爭和消耗途徑基因(meta,metB和thrB)并過表達合成途徑基因(thrA,metxlm),實現(xiàn)了OAH的積累,其產(chǎn)量達到1.68 g/L。為了進一步提高OAH的生產(chǎn),該研究采用多種代謝工程策略對工程菌株進行進一步改造,包括:敲除賴氨酸競爭途徑基因lysA;利用啟動子工程調(diào)控ppc表達以增強草酰乙0酸的供給;比較不同來源的天冬氨酸激酶,促進前體天冬氨酸的合成等,使OAH的產(chǎn)量提高至4.69 g/L。然而,中間代謝產(chǎn)物高絲氨酸的大量積累說明其下游途徑關(guān)鍵酶MetXlm的催化能力是不足的。為了解決這一問題,該研究分別采用基于進化保守性和基于結(jié)構(gòu)信息的蛋白質(zhì)工程策略對MetXlm進行改造,獲得的突變體酶活比型提高了12.15倍并受到更少的反饋抑制。通過優(yōu)化表達MetXlm突變體,使工程菌株OAH產(chǎn)量達到7.37 g/L。隨后該研究通過過表達胞內(nèi)乙酰CoA合成途徑,調(diào)控胞內(nèi)NADPH的合成,進一步提高OAH的合成能力。12月20日,瓦克集團旗下瓦克生物科技業(yè)務(wù)部門在西班牙從AntibióticosdeLeónSLU公司(簡稱ADL公司)處收購一套大型發(fā)酵設(shè)備。終獲得的工程菌株OAH-7在7.5 L發(fā)酵罐中經(jīng)60 h發(fā)酵能夠生產(chǎn)62.7 g/L的OAH,是目前報道的0高水平。
(1) ScoLeuRS與以前報道的LeuRS識別tRNALeu的傳統(tǒng)辨別子A73不同,它不識別A73,而識別C74;(2) ScotRNALeu可變環(huán)的個數(shù)而不是堿基類型與ScoLeuRS識別有關(guān);(3) ScoLeuRS識別兩類ScotRNALeu的不同處在于tRNA三級結(jié)構(gòu)拐肘結(jié)構(gòu)的三個堿基對,II類ScotRNALeu(UAA)的三對三級結(jié)構(gòu)堿基對對它的氨基酰化極為重要,而I類ScotRNALeu(CAA)中的這三個堿基對并不重要;"血同代謝基因檢測"中的三個基因:參與同型半胱氨酸代謝的相關(guān)酶基因,主要有:亞四氫葉酸還原酶MTHFR、甲硫氨酸合成酶還原酶MTRR和甲硫氨酸合成酶MTR,3種關(guān)鍵酶,若編碼這些酶的基因發(fā)生突變,可導致同型半胱氨酸代謝途徑紊亂。(4) ScoLeuRS的LSD結(jié)構(gòu)域賦予ScoLeuRS獨特的亮氨?;瘍深怱cotRNALeu的能力,鑒定了與此有關(guān)的關(guān)鍵氨基酸殘基
中國科學0院遺傳與發(fā)育生物學研究所曹曉風研究組在前期研究的基礎(chǔ)上,利用遺傳學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學和生物化學等研究手段,闡釋了AtPRMT5參與mRNA前體加工的分子機制。曹曉風研究團隊利用遺傳篩選手段鑒定了兩個能夠部分回復atprmt5突變體生長發(fā)育異常表型以及mRNA前體拼接異常的抑制子,圖位克0隆顯示這兩個抑制子編碼拼接復合體中U5 snRNP中的核心成員——Prp8 (分別為Prp8P1141S和Prp8P347S點突變)。國內(nèi)現(xiàn)今,L一半胱氨酸的生產(chǎn)主要依靠人或動物的毛發(fā)經(jīng)酸水解或堿水解提取L-胱氨酸后,再經(jīng)過電解還原制得L一半胱氨酸。