等溫核酸試劑盒

FAQ

能否進(jìn)行熒光終點(diǎn)分析?

可以。這樣比較的是反應(yīng)開始時(shí)的熒光和反應(yīng)結(jié)束時(shí)的熒光，熒光增強(qiáng)意味著發(fā)生了擴(kuò)增。

4能否支持生物素或熒光標(biāo)記的寡核苷酸?

支持。在RPA反應(yīng)中，連有生物素或熒光團(tuán)的引物與未修飾的引物表現(xiàn)差不多。據(jù)悉還沒有發(fā)現(xiàn)任何差異。

5跑膠前需要回收RPA產(chǎn)物嗎?

需要。RPA反應(yīng)中的物質(zhì)會(huì)干擾瓊脂糖電泳，如果不進(jìn)行產(chǎn)物回收，跑出來的帶會(huì)出現(xiàn)拖尾。

核酸試劑盒

英國TwistDx 公司（前身為ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴(kuò)增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

試劑盒

英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)，目前全球新的等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進(jìn)行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測，還可以對(duì)擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。