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等溫核酸試劑盒
據(jù)介紹,RPA檢測(cè)的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平,從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理,適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè),還可以對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,甚至可以通過(guò)試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。
目前,TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長(zhǎng)度在500bp以內(nèi)。不過(guò),經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增,也可以生成更長(zhǎng)的擴(kuò)增產(chǎn)物,或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量),甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。
目前,核酸檢測(cè)方法主要包括PCR法、恒溫?cái)U(kuò)增法、測(cè)序法、CRISPR檢測(cè)法等。其中,第二代PCR技術(shù)是病毒檢測(cè)方法的主流方法,也是目前認(rèn)可的SARS-CoV-2測(cè)定方法。第二代PCR技術(shù),又稱熒光PCR法,是指在反應(yīng)體系中加入了熒光物質(zhì),通過(guò)專門儀器實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè),并對(duì)模板進(jìn)行定量計(jì)算。為了增加靈敏度和特異性,熒光PCR法出現(xiàn)了不少改進(jìn)版本,包括Taqman探針?lè)ā㈦p重或多重?zé)晒釶CR等。
目前市場(chǎng)上各家生物企業(yè)研發(fā)出的核酸檢測(cè)試劑盒已經(jīng)超過(guò)100種,但由于缺乏RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),無(wú)法對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行量值傳遞和對(duì)試劑盒檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià),好的國(guó)產(chǎn)試劑盒競(jìng)爭(zhēng)力也無(wú)法得到證明。為此,急需研制RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)評(píng)價(jià)這些病毒核酸檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量和準(zhǔn)確度,為試劑盒檢測(cè)結(jié)果的判定提供準(zhǔn)繩。