等溫核酸試劑盒

試劑盒是用于盛放檢測(cè)化學(xué)成分、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。一般醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。

完整的試劑盒包含以下各組分：

(1)已包被抗原的固相載體；

(2)酶標(biāo)記的抗原（結(jié)合物）；

(3)酶的底物；

(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品(定量測(cè)定中)；

(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

(7)酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，還可以對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過(guò)試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長(zhǎng)度在500bp以內(nèi)。不過(guò)，經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長(zhǎng)的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

RNA試劑盒使用方法

使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買提取試劑盒， 如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒，但其售價(jià)較高，單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大，對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有必要購(gòu)買，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題（如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候，要從國(guó)外發(fā)貨，會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間）。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯(cuò)，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

FAQ

1 RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過(guò)，多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì)，以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測(cè)多個(gè)擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。