然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)

操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
保存方式編輯室溫。低溫保存可能會有沉淀析出。如果發(fā)生析出現(xiàn)象,請于50℃溶解后,再于室溫保存。操作方法編輯全套操作約需1小時,分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟,詳細(xì)說明如下。勻漿和細(xì)胞裂解:使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟,具體說明如下:【從動物組織中提取基因組DNA】使用研缽進(jìn)行勻漿時:① 取1~100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。注)下列組織請加液氮研磨至粉末狀。

將試劑完全倒入吸收盒內(nèi),蓋上盒蓋并輕輕搖動,搖勻后靜置10分鐘。與色卡比色,讀出被測空間(或家具)內(nèi)每立方米空氣中甲醛的濃度值。用甲醛檢測盒做檢測時,要把檢測液放入一個容器,當(dāng)空氣流經(jīng)檢測液表面,就把甲醛完全吸收。這樣就等于把檢測液放入復(fù)雜的情況中檢測,沒有任何一個檢測盒可以保證在單位時間內(nèi)流經(jīng)檢測液表面的空氣流量。這樣其受溫度、濕度、氣壓、檢測液表面積和空氣流速影響極大,從而造成檢測結(jié)果錯誤極大。