02、緩沖溶液的選擇與計(jì)算

為了保證緩沖溶液有足夠強(qiáng)的緩沖能力，在配制緩沖溶液時(shí)，需要做到：

為使共軛酸堿對(duì)的濃度比接近于1，應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對(duì)，使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。

例如，生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液，已知H2PO4-的pKa2=7.21，因此，H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對(duì)。如若配制PH=9.0的緩沖溶液，則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(duì)（pKa（NH4 ）=9.25）。

常用作緩沖溶液的酸類(lèi)由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見(jiàn)的緩沖體系有：

1、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）

2、弱堿和它的鹽（NH3·H2O---NH4Cl）

3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。

而生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris（三羥）等系統(tǒng)，生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。

三羥（Tris）是一種應(yīng)用非常廣泛的有機(jī)試劑，它的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備，可用于制作、有機(jī)合成、生物緩沖劑等。其中在生化實(shí)驗(yàn)中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都需要用Tris作為生物緩沖劑。它甚至有超過(guò)磷酸鹽緩沖液的趨勢(shì)，本文將對(duì)其衍生緩沖液進(jìn)行簡(jiǎn)述。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase（無(wú)DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）