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研發(fā):氨基為不含鈉的氨基緩沖堿,在體液中與H2CO3起反應(yīng),使 H2CO3減少,同時(shí)又生成HCO32-,能攝取氫離子而糾正酸血癥,其作用較強(qiáng),且能透過細(xì)胞膜,常用于急性代謝性及呼吸性酸血癥;作為堿性,用于酸的糾正,且不會(huì)引起二氧化碳滯留增加。由于是用于制藥,對(duì)Tris的整個(gè)生產(chǎn)原料來源、生產(chǎn)工藝路線、產(chǎn)品純度、雜質(zhì)離子含量都是嚴(yán)格要求的,采購這一類產(chǎn)品必須嚴(yán)格謹(jǐn)慎,一定要經(jīng)過嚴(yán)格檢測(cè)。
Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對(duì)來說使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時(shí),首先的準(zhǔn)備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個(gè)制作過程耗時(shí)較長(zhǎng),節(jié)約時(shí)間考慮也可以直接購買制備好的預(yù)制凝膠。
水合氫離子的濃度取決于弱酸與其共軛堿的濃度比。當(dāng)加入少量強(qiáng)堿時(shí),酸被中和,導(dǎo)致了氫氧根離子在溶液中很少累積,從而的濃度增加,的濃度減少??梢钥吹剑m然加入了強(qiáng)堿,但是溶液里的氫氧根離子變化很少,同時(shí),濃度較大,相對(duì)的變化小,兩者比值幾乎無變化,因此根據(jù)公式,水合氫離子的濃度變化很小。加入弱酸則是同樣的道理。由于在大濃度基數(shù)上的微小變化不會(huì)改變比值,也因此維持了體系內(nèi)氫離子和氫氧根離子濃度的平衡。
總的來說,TCEP是這三個(gè)還原劑中穩(wěn)定的,但它也是昂貴的。我通常在純化過程的緩沖液中添加DTT,在后保存酶液的緩沖液中添加TCEP。一般比較合理的還原劑濃度是5~10mM。基本上你要確保還原劑濃度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于你的蛋白濃度。因?yàn)镈TT和巰在室溫下就會(huì)降解,所以需要將添加了還原劑的緩沖液處于低溫保藏,或者在使用時(shí)再添加還原劑。