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河南植物原位雜交服務(wù)服務(wù)介紹“本信息長期有效”

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發(fā)布時(shí)間:2020-07-23 04:43  






武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。然后分別鋪篩選平板使細(xì)胞長成菌苔(lawn),再將兩種菌苔復(fù)印到同一個(gè)三重篩選平板上,原則上只有誘餌和靶蛋白發(fā)生了相互作用的二倍體細(xì)胞才能在此平板上生長。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)?,F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì),面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。

經(jīng)過改造帶有HIS3報(bào)道基因的酵母細(xì)胞,只有當(dāng)HIS3被啟動(dòng)表達(dá)才能在缺乏組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上生長。HIS3報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)是由“誘餌”和“獵物”的相互作用所啟動(dòng)的。大多數(shù)雙雜交系統(tǒng)往往同時(shí)使用兩個(gè)甚至三個(gè)報(bào)道基因,其中之一是 LacZ。這些改造后的基因在啟動(dòng)子區(qū)有相同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),因此可以被相同的轉(zhuǎn)錄因子(如上述的Gal4蛋白)。


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FISH:采用了已知序列的、特異性的單鏈核酸作為探針,標(biāo)記了生物素或熒光素,在一定的溫度和離子濃度下通過堿基互補(bǔ)配對(duì)法則,使得DNA-DNA原位雜交,采用熒光法顯示,將DNA在細(xì)胞爬片、組織切片(石蠟切片or冰凍切片)的原始位置上標(biāo)記出來的一種技術(shù)。對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行篩選時(shí),可采用該方法。





原位雜交在前。

(1)常規(guī)脫蠟入水。

(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

(3)滴加探針,加蓋玻片,避光、濕盒、37℃過夜孵育。

(4)如果試劑盒允許的話,將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。

(5)加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗1體,37℃孵育半小時(shí),洗去抗1體后顯色。

免1疫組化在后。

(1)將顯色后確認(rèn)為陽性的切片充分漂洗。

(2)在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中,微波至96℃左右,作用10min。

(3)滴加一抗,37℃濕盒孵育2h。

(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室溫下孵育40-50min。

(5)DAB顯色后,采用PBS中止顯色反應(yīng)。

(6)不要復(fù)染核,不然就蓋住原位雜交信號(hào)了。


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