低溫生物菌種了解多少？

研究在低溫條件下生命活動的生物化學規(guī)律的新興學科，是低溫生物學的重要基礎(chǔ)。例如，在某些冬眠狀態(tài)的昆蟲體液中，甘油含量可高達25%，以致在-35℃的狀況下也不會冰凍。另一方面，利用低溫下變化減慢，來研究在常溫下變化較快的一些生物化學反應(yīng)。如在酶的催化、蛋白質(zhì)和核酸在溶液中的空間構(gòu)象變化中。某些中間變化常溫下在千分之一秒的時間內(nèi)即可完成，用一般方法難以探討，而在含有添加劑使溫度降至-40℃左右的溶液中，反應(yīng)速度大為減慢就可用常規(guī)方法進行研究。

低溫生物菌種的濾紙保藏法

(1)將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘。

(2)將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。

(3)取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

(4)用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

(5)將安瓿管放入內(nèi)有二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

(6)將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。

(7)需要使用菌種，復活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破碎，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備。

防止低溫生物菌種退化的措施

1.合理的育種 選育菌種時所處理的細胞應(yīng)使用單核的，避免使用多核細胞；

合理選擇誘變劑的種類和劑量或增加突變位點，以減少分離回復；在誘變處理后進行充分的后培養(yǎng)及分離純化，以保證保藏菌種純碎。這些可有效的防止菌種的退化。

2.選用合適的培養(yǎng)基有人發(fā)現(xiàn)用老苜蓿根汁培養(yǎng)基培養(yǎng)“5406”抗生菌—細黃鏈霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌產(chǎn)生菌—藤倉赤霉的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天門冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘醇等物質(zhì)時，也有防止菌種退化的效果。也有選取營養(yǎng)相對貧乏的培養(yǎng)基做菌種保藏培養(yǎng)基，如培養(yǎng)基中適當限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因為變異多半是通過菌株的生長繁殖而產(chǎn)生的，當培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富時，菌株會處于旺盛的生長狀態(tài)，代謝水平較高，為變異提供了良好的條件，大大提高了菌株的退化幾率。

3.創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 在生產(chǎn)實踐中，創(chuàng)造和發(fā)現(xiàn)一個適合原種生長的條件可以防止菌種退化，如低溫、干燥、缺氧等。在棲土曲霉3．942 的培養(yǎng)中，有人曾用改變培養(yǎng)溫度的措施(從20-30℃提高到33-34℃)來防止它產(chǎn)孢子能力的退化。

4.控制傳代次數(shù)由于微生物存在著自發(fā)突變，而突變都是在繁殖過程中發(fā)生而表現(xiàn)出來的。所以應(yīng)盡量避免不必要的移種和傳代，把必要的傳代降低到很低的水平，以降低自發(fā)突發(fā)的機率。菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生突變的幾率就越高，因而菌種發(fā)生退化的機會就越多。這要求不論在實驗室還是在生產(chǎn)實踐上，必須嚴格控制菌種的移種傳代次數(shù)，并根據(jù)菌種保藏方法的不同，確立恰當?shù)囊品N傳代的時間間隔。如同時采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空凍干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延長菌種保藏時間。