T4 RNA連接酶

用途：用RNA 3'末端標(biāo)記；RNA和RNA分子間連接；寡核苷酸的環(huán)化；tRNA修飾；5' RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈；在蛋白質(zhì)特定位點引入非天然氨基酸。

來源：由大腸桿1菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。

活性定義：37℃30分鐘內(nèi)，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環(huán)形產(chǎn)物所需的酶量定義為1個活性單位。

活性檢測條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。

純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶儲存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

低堿性磷酸酶血癥的癥狀存在異質(zhì)性，其臨床癥狀多樣，需要及時進(jìn)行cure

典型癥狀

1、單純牙型乳牙會出現(xiàn)早期脫落的情況，僅僅表現(xiàn)出牙齒受累的癥狀表現(xiàn)。

2、圍生期型患者會出現(xiàn)四肢短小的癥狀，主要因為嚴(yán)重骨骼礦化不足，然后造成骨骼系統(tǒng)異常的癥狀表現(xiàn)。

3、良性新生兒型患者會出現(xiàn)骨骼畸形的情況，比如漏斗胸，以及身材矮小的癥狀，但是這種類型的癥狀，在出生以后可以達(dá)到改善。

4、嬰兒型患者會出現(xiàn)牙齒早脫的癥狀，通過X-ray檢查，可以顯示未成熟牙齒早失的癥狀，如果出現(xiàn)佝僂病的情況，患者會出現(xiàn)胸廓畸形、頭顱畸形的癥狀，患者的囟門會變得寬大，但是常常會出現(xiàn)顱縫早閉的情況。

長基因組序列、特別是包含大的基因簇的那些的克1隆對于產(chǎn)生medicine和生物燃料的合成生物學(xué)和基因工程工作特別重要。傳統(tǒng)的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的長度和GC含量：標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)常規(guī)產(chǎn)生至多10 kb的片段，而更長的PCR產(chǎn)物需要反應(yīng)條件的繁瑣優(yōu)化，并且甚至在理想條件下，通常受限于35 kb5?；蛘撸赏ㄟ^裝配多個短片段，例如重疊PCR產(chǎn)物或化學(xué)合成的DNA寡聚物，產(chǎn)生長的目的基因組序列，但這樣的方法趨于耗時和昂貴，特別是對于獲得長于50 kb的序列(其通常需要3-5階段，每個包含多個裝配事件)6,7。獲得長的基因組序列的另一方法是通過基因組DNA的限制性酶消化。