動物細(xì)胞培養(yǎng)

高速冷凍離心機(jī)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。

⑴血1清：動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血1清。相對常用的是小牛血1清。血1清提供生長必需因子，如激1素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里，血1清等于是動物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。

⑵支持物：大多數(shù)動物細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物。

⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件。

經(jīng)過了近十多年既漫長又短暫的發(fā)展，iPS細(xì)胞技術(shù)已經(jīng)取得了舉世矚目的進(jìn)展。一個個突破性的成果既給我們帶來了喜悅，也帶來了新的挑戰(zhàn)，細(xì)胞重編程有望迎來一個新的研究浪潮。盡管iPS細(xì)胞有著誘人的應(yīng)用前景，然而，未來iPS細(xì)胞的研究也面臨著許多亟需解決的問題：

首先，效率問題。目前，誘導(dǎo)產(chǎn)生iPS細(xì)胞的率仍然很低，這與基因?qū)说姆绞秸衔稽c、表觀遺傳學(xué)等多種因素有關(guān)。這已成為制約iPS從實驗室走向臨床的zui大瓶頸。因此，如何提高iPS細(xì)胞的制備效率仍是人們普遍關(guān)注的問題。

第二，安全性問題?，F(xiàn)在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞通常借助逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，將幾種癌基因轉(zhuǎn)入分化細(xì)胞誘導(dǎo)其成為iPS細(xì)胞，而這種方法就有可能會因為外源基因插入細(xì)胞基因組，干擾了內(nèi)源基因的表達(dá)，從而誘發(fā)cancer。

細(xì)胞增殖是活1細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征 ，是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA copy等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測主要分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。

物質(zhì)跨膜運輸?shù)姆绞椒譃楸粍舆\輸和主動運輸兩種。

（1）被動運輸，是順著膜兩側(cè)濃度梯度擴(kuò)散，即由高濃度向低濃度。分為自由擴(kuò)散和協(xié)助擴(kuò)散。

①自由擴(kuò)散：物質(zhì)通過簡單的擴(kuò)散作用進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞膜兩側(cè)的濃度差以及擴(kuò)散的物質(zhì)的性質(zhì)（如根據(jù)相似相溶原理，脂溶性物質(zhì)更容易進(jìn)出細(xì)胞）對自由擴(kuò)散的速率有影響，常見的能進(jìn)行自由擴(kuò)散的物質(zhì)有氧氣、二氧化碳、甘油、乙醇、苯、尿素、膽固醇、水、氨等。

②協(xié)助擴(kuò)散：進(jìn)出細(xì)胞的物質(zhì)借助載體蛋白擴(kuò)散。細(xì)胞膜兩側(cè)的濃度差以及載體的種類和數(shù)目對協(xié)助擴(kuò)散的速率有影響。紅細(xì)胞吸收葡萄糖是依靠協(xié)助擴(kuò)散。

（2）主動運輸：物質(zhì)從低濃度一側(cè)運輸?shù)礁邼舛纫粋?cè)，需要載體蛋白的協(xié)助，同時還需要消耗細(xì)胞內(nèi)化學(xué)反應(yīng)所釋放的能量。主動運輸保證了能夠按照生命活動的需要，主動選擇吸收所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝廢物和對細(xì)胞有害的物質(zhì)。各種離子由低濃度到高濃度過膜都是依靠主動運輸。能進(jìn)行跨膜運輸?shù)亩际请x子和小分子，當(dāng)大分子進(jìn)出細(xì)胞時，包裹大分子物質(zhì)的囊泡從細(xì)胞膜上分離或者與細(xì)胞膜融合（胞吞和胞吐），大分子不需跨膜便可進(jìn)出細(xì)胞。