基因槍轉(zhuǎn)化法

氣動式基因槍中具有代表性的是PDS-1000/He，利用由不同厚度的聚苯四甲酰亞1胺膜制成的可裂圓片來調(diào)控氦氣壓力。當(dāng)氦氣壓力達(dá)到可裂圓片的臨界承受壓力時，可裂圓片破1裂并產(chǎn)生強(qiáng)烈的氣流，使微彈載體攜帶微彈高速運(yùn)動，遇到剛性的阻擋網(wǎng)，微彈載體被阻遏，而微彈利用慣性繼續(xù)向前高速運(yùn)動，轟擊靶1細(xì)胞或組織，從而攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。基因槍法不再受到受體基因型的限制，又能避開原生質(zhì)體再生的障礙，從而使植物的遺傳轉(zhuǎn)化翻開了新的一頁。

基因槍轉(zhuǎn)化法在植物遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用：應(yīng)用基因槍法轉(zhuǎn)化zui早的是Klein等人在1987年將攜帶有細(xì)菌氯霉1素乙酰轉(zhuǎn)移酶（cat）基因的煙1草花葉病毒的RNA導(dǎo)入洋蔥的表皮細(xì)胞，使此基因得到表達(dá)。后來，隨著對物理參數(shù)（如金屬粒子的理化特性、DNA與金屬粒子的結(jié)合和靶組織特性等）、環(huán)境條件（如受體植株、外植體和靶組織所適宜的溫度、濕度和光照等）和生物因子（如外植體及其轟擊前后的培養(yǎng)條件等）等的技術(shù)優(yōu)化，不斷完善的基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)能實(shí)現(xiàn)對許多受體材料的轉(zhuǎn)化，包括原生質(zhì)體、懸浮細(xì)胞系、愈傷組織、外植體（幼穗、幼胚或成熟胚），甚至可以直接轟擊轉(zhuǎn)化花粉。

脂質(zhì)體法

　　是用帶正電荷的脂質(zhì)體作載體攜帶外源基因，與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜融合，把外源基因?qū)爰?xì)胞。用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，其毒性較電1擊法和PEG法小，且適于運(yùn)輸大分子DNA穿過質(zhì)膜。

　　Antonelli等（1990）用該法將基因組DNA轉(zhuǎn)入BMS玉米原生質(zhì)體，獲得轉(zhuǎn)化了的再生愈傷組織，轉(zhuǎn)化率高達(dá)8%。

　　脂質(zhì)體法的優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)化受體為單個細(xì)胞，易于篩選，不易形成嵌合體，對于原生質(zhì)體再生能力好的植物品種，是非常好的轉(zhuǎn)化方法。

典型的腺病毒載體系統(tǒng)如：穿梭質(zhì)粒pCA13/腺病毒基因組質(zhì)粒pBHG11/包裝細(xì)胞293細(xì)胞。pCA13/的HCMV IE啟動子－多克1隆位點(diǎn)－SV40 AN（poly A）構(gòu)成外源基因的表達(dá)盒，該表達(dá)盒的插入使腺病毒E1基因缺失，但是保留其兩端側(cè)翼序列（左側(cè)的1~3bp的ITR，右側(cè)從3.5kb到末端的維持病毒裝配和活力必須的蛋白IX的基因），也保留了腺病毒的包裝信號

φ（194~358bp）；pBHG11則保留了腺病毒基因組的絕大部分，但是缺失了包裝信號φ、0.5~3.7圖距（mu）部分的E1區(qū)、77.5～86.2mu的E3區(qū)，293細(xì)胞是整合有Ad5 E1基因的人胚shen細(xì)胞系。pBHG11因?yàn)槿笔Оb信號及E1區(qū)而不能copy，pCA13帶有包裝信號及E1的側(cè)翼序列，但是缺失E1區(qū)及腺病毒絕大部分基因組，同樣不能copy。外源目的基因插入pCA13后，與pBHG11共轉(zhuǎn)染，進(jìn)入293細(xì)胞。pCA13與pBHG11在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生同源重組，同時，293細(xì)胞提供E1蛋白，從而包裝產(chǎn)生腺病毒顆粒。該病毒的蛋白質(zhì)外殼同野1生型腺病毒相似，具有同樣的感1染力進(jìn)入靶1細(xì)胞的能力，但是基因組DNA的E1區(qū)被外源目的基因取代，即進(jìn)入靶1細(xì)胞后病毒不能copy，但可以表達(dá)目的蛋白。