基于基因工程技術(shù)制備小分子特異性antibody

通過大量的實驗發(fā)現(xiàn)，小分子的偶聯(lián)物并不是不能產(chǎn)生特異性針對小分子的抗1體，而是效價過低，不滿足制備多克1隆抗1體和單克1隆抗1體的需要，但是基因工程手段為制備該類型小分子特異性antibody提供了新的思路。該技術(shù)的核心在于制備antibody的基因文庫，通過噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等獲取antibody的目的基因，再利用蛋白表達系統(tǒng)制備重組antibody或者改造antibody，以獲取針對小分子的特異性antibody。目前隨著antibody基因測序信息的公布和完善，為人工設(shè)計antibody提供了基礎(chǔ)，這也會以后小分子特異性antibody的制備提供了新的途徑。

RNA試劑盒注意事項

所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測。

使用時一定要根據(jù)自己的實驗需要購買專1用提取試劑盒， 如果不是專1用試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析、分子克1隆等后續(xù)實驗的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當(dāng)然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內(nèi)無貨的時候，要從國外發(fā)貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以

與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。

RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同，不過除了A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。

在細胞中，根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉(zhuǎn)運RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板，內(nèi)容按照細胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄；tRNA是mRNA上堿基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質(zhì)合成的工作場所。

PCR產(chǎn)物的回收（膠回收試劑盒）

1.膠回收的目的（1）去除非特異性擴增的產(chǎn)物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段

2.膠回收的過程（1）切膠：紫外下切膠，稱重。之后用槍頭將膠塊搗碎。切膠的刀片建議選用一次性刀片，實驗臺等也盡可能用乙醇擦拭干凈?？赏ㄟ^空EP管與裝膠EP管質(zhì)量的差值計算膠的質(zhì)量。注意切膠時盡可能避免切到條帶外的凝膠，且避免紫外時間過長。別忘記膠條有厚度，前后多余的部分也盡量切除。（2）溶膠：每1 mg膠加入1 μL膜結(jié)合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。每1~2 min震蕩混勻，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，保證膠塊完全溶解。在電泳過程中，DNA會與大分子的多糖緊密結(jié)合，凝膠的種類和質(zhì)量不同，DNA與之結(jié)合力也不同，只有凝膠充分溶解DNA才能充分釋放。否則，凝膠將與DNA一起沉淀下來，洗脫后將影響回收結(jié)果的純度。（3）結(jié)合：將溶膠轉(zhuǎn)移至純化柱內(nèi)，12000 rpm離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將純化柱重新插回收集管中。膠塊完全溶解后建議將膠液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在溫度較高時結(jié)合DNA的能力較弱。