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時間分辨熒光分析法是目前與化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光并駕齊驅(qū)的三種超敏分析方法之一。其原理是采用較長熒光半衰期的稀土離子作標記物,由于這種標記物Stokes位移大(>150nm)且熒光壽命比本底物質(zhì)熒光壽命高5~6個數(shù)量級,因此,測定時只要延緩測量時間,待本底物質(zhì)的熒光充分衰減后再測定標記物的信號就可有效地消除各種非特異性熒光的干擾,獲得很高的靈敏度。
在蛋白質(zhì)混合液的包被中,分子量大的蛋白,會優(yōu)先被吸附到微球表面。在佳的pH下,將微球和蛋白混合在一起,微球很容易對類似于這類物質(zhì)的進行特異性吸附,然后通過離心等方法,可將未交聯(lián)的蛋白除去。
表面功能化的微球可以和蛋白質(zhì)(或其它生物分子)發(fā)生共價偶聯(lián),從而實現(xiàn)微球與蛋白質(zhì)(或其它生物分子)的共價結(jié)合。
羧基修飾微球經(jīng)過EDC/NHS活化之后,很容易與蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。值得注意的是,這些微球在高濃度的電解質(zhì)(高達1 M的一價鹽)中更加的穩(wěn)定。
聚苯乙烯熒光微球具有熒光強度,性能穩(wěn)定,粒徑分布窄等特性, 可廣泛用于診斷、血流測定、示蹤、體內(nèi)成像,以及成像儀器和流式細胞儀的校準。 因為,我們的染料并非結(jié)合在微球表面上,而是填充到微球內(nèi)部,所以它們相對不易受光漂白作用和其他環(huán)境因子的影響,微球就算經(jīng)過高速離心,也不會發(fā)生染料泄露。羧基化修飾的微珠表面有高密度的均勻分布的羧酸, 這使得它們適合于通過諸如碳化二 (EDAC) 等水溶性的類試劑共價偶合蛋白質(zhì)和其他含有胺基的生物分子。