低溫生物菌種的改良

改良

即采用遺傳育種的方法，使菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變、重組，從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷－60、乙烯胺類等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液，以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選，從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中，有益突變所占比例很低，要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選?？筛鶕?jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性，如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種“理性篩選法”廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。

低溫生物知多少？

實(shí)驗(yàn)室的傳代保藏過程

1. 按說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用。此時(shí)，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉(zhuǎn)種后的G2經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當(dāng)工作用代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細(xì)菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。

低溫生物通用工藝包

生物的產(chǎn)品在不同規(guī)模的小試和中試系統(tǒng)上進(jìn)行過工藝開發(fā)與連續(xù)生產(chǎn)，已開發(fā)出在多種應(yīng)用場(chǎng)景下利用吉態(tài)來生物微生物進(jìn)行生產(chǎn)的通用工藝包。使用過的原料包括：合成氨弛放氣、焦?fàn)t煤氣、生物質(zhì)氣化氣、鋼瓶氣和工業(yè)等。產(chǎn)出的產(chǎn)物包括：飼料蛋白原料（魚粉替代物）、生物油脂（脂肪酸）、生物柴油（脂肪酸甲酯）等大宗原料或產(chǎn)物，以及蛋白酶、DHA等高附加值產(chǎn)物。中試實(shí)現(xiàn)連續(xù)運(yùn)行、穩(wěn)定生產(chǎn)。該通用工藝包采用模塊化設(shè)計(jì)，其中模塊A為吉態(tài)來生物的產(chǎn)品，B/C/D為對(duì)應(yīng)的發(fā)酵模塊、原料預(yù)處理模塊以及產(chǎn)物后處理模塊。工程企業(yè)可直接使用該工藝包進(jìn)一步優(yōu)化，或在此基礎(chǔ)上為業(yè)主提供工程項(xiàng)目的定制解決方案

低溫生物菌種的存儲(chǔ)及施用規(guī)范

儲(chǔ)存和施用技術(shù)嚴(yán)格

溫度、光照、酸堿度和滲透壓等環(huán)境因素都能影響到微生物的存活。儲(chǔ)存微生物肥料應(yīng)選擇避光、低溫環(huán)境條件。施用微生物肥料應(yīng)防止長時(shí)間暴露在陽光下，以免紫外線殺滅肥料中的微生物；微生物肥料不應(yīng)直接與化肥混合施用，以免因滲透壓的改變而抑制或殺滅其中的有效菌等。

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