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注意: 1、不建議將爬片泡酸后高壓滅菌,首先玻片太薄高壓容易使玻片變形,其次濕滅很容易使玻片上留下水漬影響細(xì)胞貼壁;
2、接細(xì)胞時控制合適的細(xì)胞量,避免收樣時細(xì)胞量過度擁擠甚至打堆影響結(jié)果的觀察。
武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。4、實驗完畢后清理實驗臺面,將載玻片清洗后用75%酒精浸泡,以備回收使用。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢,面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。研究者首先通過熒光成像技術(shù)來定義細(xì)胞器和亞細(xì)胞區(qū)的蛋白質(zhì)組信息。通過測定30個亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的蛋白定位,在細(xì)胞圖譜中定義了13個亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組以及分泌蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組,通過熒光顯微鏡在細(xì)胞圖譜中注釋的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。研究人員以蛋白質(zhì)圖譜中的蛋白空間信息對蛋白的互作關(guān)系進(jìn)行驗證(圖5)。結(jié)果表明,在質(zhì)膜上的蛋白擁有更多的機會與質(zhì)膜、高爾基體、囊泡、黏著斑、細(xì)胞接頭及細(xì)胞溶質(zhì)中的蛋白發(fā)生直接的互作關(guān)系。
基本途徑 糖酵解在胞液中進(jìn)行,其途徑可分為兩個階段。階段從葡萄糖生成2個磷酸丙糖。第二階段由磷酸丙糖轉(zhuǎn)變成酸,是生成ATP的階段。
階段包括4個反應(yīng): (1)葡萄糖被磷酸化成為6-磷酸葡萄糖。5、Marker種類:線粒體、葉綠體、細(xì)胞核定位、細(xì)胞膜定位、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)6、可以在實驗后保留瞬時轉(zhuǎn)染的葉片供后續(xù)檢測。此反應(yīng)由己糖激酶或葡萄糖激酶催化,消耗1分子ATP; (2)6-磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)變成6-磷酸果糖; (3)6-磷酸果糖轉(zhuǎn)變?yōu)?,6-二磷酸果糖。此反應(yīng)由6-磷酸果糖激酶-1催化,消耗1分子ATP; (4)1,6-二磷酸果糖分裂成二個磷酸丙糖。 第二階段由磷酸丙糖通過多步反應(yīng)生成酸。在此階段每分子磷酸丙糖可生成1分子NADH H 和2分子ATP,ATP由底物水平磷酸化產(chǎn)生。
蛋白亞細(xì)胞定位主要有兩種方法,一種是結(jié)果準(zhǔn)確但費時費力的實驗驗證方法,如熒光蛋白標(biāo)記與Western/SDS-PAGE等;第二種方法是通過生物信息學(xué)手段,借助計算機對蛋白的亞細(xì)胞定位信息進(jìn)行預(yù)測,這種方法可以在短時間獲得大量蛋白的預(yù)測信息,而我們今天介紹的是便是第二種方法。研究人員以蛋白質(zhì)圖譜中的蛋白空間信息對蛋白的互作關(guān)系進(jìn)行驗證(圖5)。目前常用的亞細(xì)胞定位分析軟件主要采用三種分析策略:N端排序或信號分子序列分析;氨基酸序列組成分析;結(jié)合多種策略(N端信號序列,氨基酸序列組成,功能域,相似度,GO分類)的分析。