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食品加工廠核酸提取純化擇優(yōu)推薦「在線咨詢」

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發(fā)布時間:2021-04-30 14:53  






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廣州勱博--養(yǎng)豬場熒光定量PCR

熒光定量PCR技術(shù)產(chǎn)生并成熟于上世紀(jì)90年代,由于該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,能夠?qū)CR反應(yīng)的全過程進(jìn)行實(shí)時監(jiān)控,并且自動化程度高,所以該技術(shù)從產(chǎn)生到現(xiàn)在短短的十幾年時間,在科研及檢驗(yàn)領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的一項(xiàng)重要技術(shù)。Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號隨著PCR反應(yīng)的積累來實(shí)時監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過分析軟件對PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測分析的技術(shù)。系統(tǒng)組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。

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進(jìn)行熒光定量PCR體系的配制時i好在冰上進(jìn)行,操作環(huán)境不用非得在超凈臺中進(jìn)行,環(huán)境安靜整潔都可以。上機(jī)器前最i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。因?yàn)槊恳粋€梯度要做三個重復(fù),因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。實(shí)驗(yàn)中我使用過熒光定量八聯(lián)管和96孔板,個人推薦96孔板。因?yàn)榘寺?lián)管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯(lián)管弄斷或者液體撒出來。有的時候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機(jī)器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。


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廣州勱博--養(yǎng)豬場PCR

熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。但在實(shí)際的PCR反應(yīng)過程中,隨著反應(yīng)的進(jìn)行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴(kuò)增,而是按線性的方式增長進(jìn)入平臺期。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯i仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

近年來,分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)發(fā)展迅速,熒光定量PCR(QF-PCR)技術(shù)、熒光原位雜交(FISH)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)、實(shí)時熒光PCR技術(shù)、染色體微陣列分析(CMA)技術(shù)、產(chǎn)前液相芯片(BoBs)技術(shù)、無創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(NIPT)等已逐漸成熟,并開始向臨床轉(zhuǎn)化。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測對象,不需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補(bǔ)充。


廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。熒光定量PCR結(jié)果可以用于定性(判斷一段序列的有無),也可以用于定量(確定DNA拷貝數(shù)),即qPCR,而常規(guī)PCR只能做半定量。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達(dá),臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達(dá)40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結(jié)、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測確診。

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非洲是一種傳i染性強(qiáng),危害嚴(yán)重的豬感i染病毒性疾病。如果生產(chǎn)者認(rèn)可排除豬源原料是可行的,那么還應(yīng)該考慮到那些間接的豬源原料,像添加劑、基礎(chǔ)混合物和那些可能源于豬源的動物蛋白或脂肪等。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關(guān)制品中存活時間很長,這一特點(diǎn)使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術(shù)在傳i染病診斷上具有廣泛的應(yīng)用,該技術(shù)靈敏度高,特異性強(qiáng),能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進(jìn)行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術(shù)。


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