樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？

（1）了解一下樣品的性質(zhì),根據(jù)其酸堿性,極性等性質(zhì)，通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑的pH值等,以達(dá)到較好的溶解度。

（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑以助溶。

（3）不是一定要用流動(dòng)相來(lái)溶解樣品，對(duì)溶解度差的樣品，可以選擇甲醇，THF或DMSO等溶解樣品。特別是DMSO，對(duì)一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不會(huì)造成干擾。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會(huì)影響峰型。

（4）可以固體上樣。

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國(guó)外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測(cè)一下凍干品中的殘留量，只要不超過(guò)允許范圍，這種辦法是很簡(jiǎn)單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(huà)(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋?zhuān)M量也先過(guò)一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話(huà)，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過(guò)上述方法就無(wú)法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來(lái)?；蛘咴诶锩婕尤胍欢康柠}酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

紙層析

紙層析，又稱(chēng)紙色譜，以一種特殊設(shè)計(jì)的濾紙作為固定相。濾紙中的纖維素層含有的水分作為固定相。緩沖液和其他溶劑用作流動(dòng)相。分離的原理是相似相溶。紙色譜法可以分析的樣品非常廣。用毛細(xì)管或微量吸管將流動(dòng)相中溶解的樣品標(biāo)記在濾紙上，然后將濾紙放入容器中，使其浸入溶劑中，于陰暗處進(jìn)行層析，樣品將在濾紙表面分離，然后對(duì)其形成的顏色進(jìn)行識(shí)別。紙色譜可以分析碳水化合物、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、糖苷、血液和尿液等樣品中的代謝物。