液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個組分，A、B和C，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動力學(xué)兩方面的綜合效益。

經(jīng)常有客戶疑惑，柱子是否可以反沖？

什么樣的柱子可以反沖？什么不可以？

反沖后是正著用，還是反著用？

一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。月旭的絕大多數(shù)色譜柱都是可以反沖，并且我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

　制備液相色譜的特點

      1、制備液相色譜采用了自動進樣器與全封閉樣品瓶,極大地解放了人力;

　　2、使用高精度HPLC制備色譜泵,重現(xiàn)性良好;

　　3、使用了儀器標(biāo)配ELSD檢測器,可用于無紫外吸收樣品檢測;

　　4、使用高壓梯度混合,不需要脫氣機,梯度基本無滯后;

　　5、可使用5u或10u的制備色譜柱,分離效能可與分析柱等同;

　　6、制備色譜采用燈-鎢燈組合光源,光譜范圍覆蓋190nm-900nm;

　　7、帶有單色儀自校正功能,波長準(zhǔn)確性可達0.2 nm;

　　8、帶有光源自檢功能,管理光源壽命,提醒及時更換;

　　9、可使用各種光程的外置式流通池,更換極為方便;

　　10、儀器支持FLASH色譜組件與中壓色譜組件,使用成本更低;

　　11、檢測器同時檢測4個波長的色譜峰,并可以同圖顯示 并指導(dǎo)收集;

　　12、采用1200線高分辨光柵,在紫外-可見范圍具有良好的分光效能。

半制備液相色譜層析系統(tǒng)如何關(guān)機

      1、點擊中斷后沖幾分鐘，將流速設(shè)為0，待壓力為0后將吸頭轉(zhuǎn)移到中，并把流速設(shè)為10;

　　2、沖到已經(jīng)沒有東西被沖下為止，一般需要半個小時。一般此時壓力早已穩(wěn)定;

　　3、將流速設(shè)為0，點擊界面上的關(guān)閉(在啟動旁邊);

　　4、關(guān)閉窗口，彈出的窗口都點肯定的，如確定是等;

　　5、關(guān)閉儀器和電腦;

　　6、關(guān)閉插板。