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什么是制備液相色譜儀?
制備液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動(dòng)相的多少來決定制備液相色譜,而是依據(jù)分離目的來決定。分析液相的目的是給一種組份進(jìn)行定量和定性。制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化。與傳統(tǒng)的純化方法(如蒸餾、萃?。┍容^,制備液相是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展。
什么是液相色譜?
液相色譜(liquid chromatography,LC)是一種色譜技術(shù),用于分離和分析溶液中混合物的化學(xué)成分,以確定是否存在或不存在特定成分,如果存在,則存在多少。我們中的許多人會從上學(xué)開始就熟悉平面LC的形式,在濾紙上打上黑色墨水標(biāo)記,將一端浸入水中,然后觀察墨水中的成分顏色是否分開。但是,分析應(yīng)用中使用的大多數(shù)LC均基于柱色譜法,這將是本文的重點(diǎn)。顧名思義,液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是使用高色譜分辨率進(jìn)行分離的高的性能分析。分離的組分也可以在檢測后使用餾分收集器分離,作為純化的手段。HPLC有多種不同的配置,可用于分離分子量從半揮發(fā)性小分子到幾萬千道爾頓的大蛋白生物分子的溶解組分。液相色譜法是一種非常流行的分析技術(shù),廣泛用于環(huán)境監(jiān)控,農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。
經(jīng)常有客戶疑惑,柱子是否可以反沖?
什么樣的柱子可以反沖?什么不可以?
反沖后是正著用,還是反著用?
一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖,不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,反沖后還是正著用比較好,以免柱子的兩頭都被污染。月旭的絕大多數(shù)色譜柱都是可以反沖,并且我們一直提倡的是:正向使用,反向沖洗。
液相色譜儀分類
液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動(dòng)相分離過程的物理化學(xué)原理,可分為以下五種。
1、吸附色譜:
用固體吸附劑作固定相,以不同極性溶劑作流動(dòng)相,依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。
2、分配色譜:
用載帶在固相基體上的固定液作固定相,以不同極性溶質(zhì)作流動(dòng)相,依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動(dòng)相相對極性的差別,又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動(dòng)相的極性時(shí),可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動(dòng)相的極性時(shí),可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。
3、離子色譜:
用微粒離子交換劑作固定相,以具有一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相,依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。
4、體積排阻色譜:
用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相,按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動(dòng)相的體積排阻色譜柱,稱為凝膠過濾色譜;以有作流動(dòng)相的體積排阻色譜法,稱為凝膠滲透色譜法。
5、親和色譜:
以在不同基體上,鍵合多種不同特性的配位體作固定相,用具有不同pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相,依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別,而實(shí)現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。