ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)

1、 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留 洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色 棄去底物，重新配置

3  樣品稀釋液污染 棄去稀釋液，重新配置

4  吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底 吸頭盡可能一次性使用

5  不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間） 常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求。

6  偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適的濃度

7  ELISA板子不正確的貯存 酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板

8  沒有正確封閉 在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

9  樣本溶血嚴(yán)重 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴(yán)重溶血樣本會導(dǎo)致背景偏高。

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  錯誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品  加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤  按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3  標(biāo)準(zhǔn)品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4  錯誤的倍比稀釋步驟  按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5  波長選擇錯誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。

6  標(biāo)準(zhǔn)品混用  不同批號試劑勿混用

7  試劑盒在運(yùn)輸途中時間太長，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活  盡量縮短運(yùn)輸時間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）