等溫核酸試劑盒

FAQ

能否對模板進行定量?

可以。擴增子達到可檢出水平的時間，依賴于反應起始時的模板量。初始模板的拷貝越多，擴增子就越快達到可檢出水平。不過，這種定量需要精心的實驗安排，確保對照反應是同時開始的。舉例來說，可以利用鎂離子的添加時間進行控制。因為鎂離子一旦進入體系，RPA反應就會開始。

此外，較慢的擴增過程有助于更準確的定量。我們可以通過調(diào)整反應條件或引物設計來減慢RPA的反應速度。

核酸試劑盒的原理

核酸檢測，其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。現(xiàn)在核酸檢測試劑盒（多重熒光RT-PCR法），能夠?qū)崿F(xiàn)一小時快速精準診斷。

根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進行核酸檢測帶你揭秘全過程》，目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒獨特的基因序列為檢測靶標，通過PCR擴增，使我們的選擇這段靶標DNA序列指數(shù)級增加，每一個擴增出來的DNA序列，都可與我們預先加入的一段熒光標記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，累計的熒光信號就越強。

核酸試劑盒

RPA技術主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。RPA擴增的基礎體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準備好引物和模板就行。擴增結(jié)果可以通過凝膠電泳進行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進行動力學分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴增。

RPA的特性

1. 快速檢測15min進行單分子檢測試驗

2.簡易包裝穩(wěn)定凍干形式試劑

3. 無需熱循環(huán)過程擺脫任何儀器束縛

4.便攜設備要求低，貧瘠條件亦能完成檢測

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