喚醒盛水的低溫生物菌種

目前，保藏中心保存有各類微生物資源5700種、50000余株，用于專利程序的生物材料有1萬余株。那么，數(shù)目龐大的微生物資源，從“清醒”到被“沉睡”經(jīng)歷了什么？

“首先進(jìn)行存活度和純度檢測，然后用基因測定來核實(shí)菌種的正確性，繼而用真空冷凍干燥法或液氮超低溫凍結(jié)法保存菌種?！北２鼐N時(shí)一般兩種方法會(huì)互為備份，使用液氮法保存6份，真空法則要備份12個(gè)。

“通過冷凍技術(shù)處理后，細(xì)菌就會(huì)處于休眠狀態(tài)。如果要活化使用，則需通過相應(yīng)的培養(yǎng)液進(jìn)行活化，才能恢復(fù)活性?！币愿袷鲜塞}堿為例說，復(fù)活菌種所需的營養(yǎng)為：20%的氯化鈉，酪蛋白、氨基酸、pH值為9等，在適宜的溫度和培養(yǎng)基中，這些沉睡的細(xì)菌便會(huì)被重新喚醒。

低溫生物菌種的冷凍干燥保藏法

(1)準(zhǔn)備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15)，大小要求外徑6-7.5mm，長105mm，球部直徑9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘，備用。

(2)準(zhǔn)備菌種，用冷凍干燥法保藏的菌種，其保藏期可達(dá)數(shù)年至十?dāng)?shù)年，為了在許多年后不出差錯(cuò)，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然后在適培養(yǎng)基中用適溫度培養(yǎng)，使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細(xì)菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期，若用對數(shù)生長期的菌種進(jìn)行保藏，其存活率反而降低。一般，細(xì)菌要求24-48小時(shí)的培養(yǎng)物;酵母需培養(yǎng)3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7-10天。

(3)制備菌懸液與分裝以細(xì)菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0.2ml。

(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售，價(jià)值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置，可達(dá)到同樣的目的。

將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精的液或干冰酮液，溫度可達(dá)-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4-5分鐘，即可使懸液結(jié)冰。

低溫生物菌種德選育和培養(yǎng)

要看你選什么規(guī)模的發(fā)酵是小試還是中試還是生產(chǎn)？另外，你說的菌種選育里應(yīng)該是包括了培養(yǎng)基配制和擴(kuò)大培養(yǎng)。所以，只能大概列一下。

菌種選育：超低溫冰箱、無菌室、培養(yǎng)箱、搖床、分光光度計(jì)、檢測設(shè)備。

培養(yǎng)基配制：電子天平、pH計(jì)、滅菌鍋、微波爐、電磁爐、冰箱。

擴(kuò)大再培養(yǎng)：滅菌鍋、搖床、抽濾瓶（或特質(zhì)金屬瓶）、空調(diào)機(jī)組、臭氧發(fā)生器。

發(fā)酵：配料罐、種子罐、發(fā)酵罐、補(bǔ)料罐（小試用流加泵）、有時(shí)會(huì)用到在線監(jiān)測設(shè)備如乙醇檢測儀、生物傳感器、分光光度計(jì)等、空壓機(jī)、。

分離提純：制水設(shè)備、制冷設(shè)備、濃縮機(jī)、細(xì)胞破碎儀、離心機(jī)、陶瓷膜、真空干燥設(shè)備、超低溫冷干機(jī)、造粒設(shè)備（不同產(chǎn)品用到不同的烘干設(shè)備）等，不同工藝所用設(shè)備也不同