組成編輯完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或的固相載體(吸附劑);(2)酶標記的抗原或(結合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制(定量測定中);(5)結合物及標本的稀釋液;(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;(7)酶反應終止液,常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的終體積而異,在板式ELISA中一般采用3mol/L。

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。
制備方法編輯包括以下步驟:1)抗原表位的計算機篩選;2)抗原的制備;3)的采集;4)間接ELISA方法的建立;5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證;6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證;7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性合格、重復性好。應用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出豬的戊型病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測,可用于豬戊肝的快速診斷,并預防、控制豬戊毒的流行和阻斷戊毒由豬向人傳播。

加酶標:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“ ”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。