原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精3確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，始于20世紀(jì)60年代。

原位PCR；原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù)，在細(xì)胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對(duì)靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。

間接標(biāo)記的方法中應(yīng)用了報(bào)告分子標(biāo)記的探針，報(bào)告分子通過親和酶促的方法進(jìn)行顯色。常用的報(bào)告分子如地高6辛，生物素。結(jié)合地高6辛抗6體或鏈霉親和素上耦聯(lián)的酶系統(tǒng)進(jìn)行間接的底物反應(yīng)檢測(cè)。地高6辛標(biāo)記核酸的歷史可追溯到1987年，由于地高6辛是洋地黃的花和葉中特有的成分，檢測(cè)時(shí)使用的地高6辛抗6體不會(huì)結(jié)合于其他的生物分子。這是相較于生物素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)。地高6辛抗6體上可耦聯(lián)堿性磷酸酶、過氧化酶，及熒光分子和膠體金等，根據(jù)不同的應(yīng)用需求，呈現(xiàn)高信噪比的核酸檢測(cè)結(jié)果。但需注意，由于引入了免6疫檢測(cè)反應(yīng)，在放大檢測(cè)靈敏度的同時(shí)，應(yīng)注意樣品內(nèi)源性酶的滅活，以降低檢測(cè)背景。

通過不同標(biāo)記方法的聯(lián)合應(yīng)用，還可在同一樣本中實(shí)現(xiàn)染色體不同區(qū)域或細(xì)胞樣本中不同RNA序列的多重檢測(cè)。

顯色原位雜交 (CISH)

顯色原位雜交 (CISH) 能讓您利用組織學(xué)實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)存在的方法在組織形態(tài)學(xué)背景下獲取遺傳信息。 我們提供用于CISH分析的CISH DNA探針和關(guān)鍵試劑。

熒光原位雜交 (FISH)

多重?zé)晒庠浑s交 (FISH) 能讓您利用單一樣本同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)并直觀顯示共定位情況。 使用不同光譜的熒光基團(tuán)標(biāo)記每種不同的雜交探針，這種方法能讓您在單一樣本中解析多種遺傳成分或多基因表達(dá)模式，并提供多色直觀顯示。

總的來說，隨探針濃度增加，雜交率也增加。另外，在較窄的范圍內(nèi)，隨探針濃度增加，敏感性增加。依我們的經(jīng)驗(yàn)，要獲得較滿意的敏感性，膜雜交中32P標(biāo)記探針與非放0射性標(biāo)記探針的用量分別為5～10 ng/ml和25～1000ng/ml，而原位雜交中，無論應(yīng)用何種標(biāo)記探針，其用量均為0.5～5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度，但受不同類型標(biāo)記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。