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ELISA試劑盒的發(fā)展前景
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并肯定會讓對整個生命科學有一個徹底的認識,其對測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
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ELISA試劑盒的試驗原理
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
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Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
顯色淡,靈敏度偏低
1 試劑盒未充分平衡 試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)
2 樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件(例如稀釋液的成分)
3 酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥
4 包被遭到破壞 操作溫和,移液槍不能碰到孔底
5 樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件,建議孵育過程中全程振蕩孵育。
6 洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間;
7 偶聯(lián)HRP試劑污染 棄去試劑,重新配置
8 錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑,重新配置
9 TMB底物孵育時間過短,因非人為因素影響,需要優(yōu)化孵育時間 確定合適的孵育時間:人為判定-高濃度的標準品出現(xiàn)深藍色;S4-5有淡藍色;機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65
10 樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應 建議做不同稀釋倍數(shù),確認樣本稀釋倍數(shù)。
11 濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對 確認儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。
12 酶標板不適合做ELISA 不能使用細胞培養(yǎng)板,建議使用ELISA高吸附力板子。