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武漢賽爾夫科技有限公司是一家專業(yè)的色譜儀器和色譜消耗品的生產(chǎn)商和供應(yīng)商。我們一直致力于色譜分析和色譜分離純化技術(shù)研究,公司產(chǎn)品包括分析型液相色譜儀,半制備、制備型液相色譜儀。
進(jìn)樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。因此在隨流動相通過色譜柱的過程中,作用力強的樣品離子保留時間要比作用力弱的離子長,經(jīng)過一段時間后,就可以實現(xiàn)樣品的分離。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。
液相色譜更適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì),因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑,劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質(zhì)的分析。高壓泵HPLC使用的色譜柱是很細(xì)的(1~6 mm),所用固定相的粒度也非常?。◣爪蘭到幾十μm),所以流動相在柱中流動受到的阻力很大,在常壓下,流動相流速十分緩慢,柱效低且費時。為了達(dá)到快速、分離,必須給流動相施加很大的壓力,以加快其在柱中的流動速度。為此,須用高壓泵進(jìn)行高壓輸液。功能如果所進(jìn)行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析,而是為了做其它波譜鑒定,或獲取少量試驗樣品的小型制備,餾分收集是必要的。高壓、高速是液相色譜的特點之一。HPLC使用的高壓泵應(yīng)滿足下列條件:a. 流量恒定,無脈動,并有較大的調(diào)節(jié)范圍(一般為1~10 mL/min);b. 能抗溶劑腐蝕;c. 有較高的輸液壓力;對一般分離,60×10^5Pa的壓力就滿足了,對分離,要求達(dá)到150~300×10^5Pa。
流動相的選擇除了和分析色譜同樣的考慮外,在選用流動相時,要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說,不宜采用高毒性溶劑,對多元溶劑要盡可能的少用。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,溶劑的純度也要考慮在其中。組分保留時間的估計用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間后,按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定,通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域。分析譜圖的峰形狀,對確定保留時間也有很大的參考價值。