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發(fā)布時(shí)間:2021-10-04 14:32  






常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。(2) 包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。



酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。



【從全血中提取基因組DNA】① 取10~250 μl的全血(含抗凝劑)加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘后,冰浴5分鐘。注) 人與動(dòng)物的抗凝全血的一次處理量為≤250 μl;禽類、兩棲類的抗凝全血的一次處理量為≤10 μl。【從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】三.使用懸浮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞時(shí):① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的細(xì)胞懸浮液,5,000 rpm離心5分鐘,棄上清(細(xì)胞培養(yǎng)液)。② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細(xì)胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘,然后室溫靜置1分鐘。



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