蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過一種鹽或有機化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長所需的核。對小分子的結(jié)晶來說，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個能障被突破了，晶體開始生長。能障在高水平的過飽和度時很容易克服。因此，在高過飽和度時，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個過飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過多種方法來研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長正式開始。對低分子量的化合物而言，新分子會逐步結(jié)合到正在生長的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板技術(shù)

提出來的一項新型的分析技術(shù),是當前分析科學(xué)活躍的發(fā)展領(lǐng)域之一,代表了新世紀分析儀器的發(fā)展方向。微流控芯片的發(fā)展有賴于不斷出現(xiàn)的微機電加工技術(shù),微流控芯片的結(jié)構(gòu)越來越復(fù)雜,功能也越來越多樣化,由此,研究和探索簡便的加工技術(shù)成為微流控技術(shù)發(fā)展的一個重要組成部分,本的研究工作將圍繞著微流控蛋白質(zhì)結(jié)晶芯片不同材料的性能與功能要求來進行相關(guān)加工技術(shù)的探討。 蛋白質(zhì)結(jié)晶微流控芯片是一種用于蛋白質(zhì)結(jié)品條件高通量、快速篩選的新設(shè)備,對于結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展具有重要意義,是目前研究的熱點。本根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)晶系統(tǒng)的要求,設(shè)計了具有雙層結(jié)構(gòu)的微流控芯片。

蛋白結(jié)晶板

以蛋白質(zhì)晶體學(xué)為主要手段的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)研究通常包括選靶、、表達、純化、晶體篩選與優(yōu)化、X射線衍射數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)解析等步驟。其中,獲得滿足衍射數(shù)據(jù)收集要求的高質(zhì)量蛋白晶體是大的'瓶頸'。我們在人類細胞內(nèi)氯離子通道蛋白2(CLIC2)結(jié)構(gòu)與功能研究中發(fā)現(xiàn)用5,5'二硫雙-2-甲酸(處理,可以顯著提高CLIC2晶體質(zhì)量,成功收集了分辨率至2埃的衍射數(shù)據(jù)試劑作為一個檢測巰基化合物的經(jīng)典試劑,通常用在半胱氨酸或含量測定上。在蛋白晶體學(xué)領(lǐng)域里以獲得蛋白晶體為目的的試劑修飾例子實際并不多。我們將其應(yīng)用在蛋白結(jié)晶學(xué)領(lǐng)域,使用Ellman試劑修飾方法使蛋白晶體質(zhì)量得到有效改善。